一篇文章搞懂植物激素检测，科研用户植物激素检测高频问题汇总

一、采样与前处理

植物鲜样采集后怎么预处理才不会让激素降解？

汉广要求：田间/温室采后立即液氮速冻，-80℃ 暂存；全程避光，IAA 对光极敏，GA 在 >40℃ 快速分解，不能用冰袋或常温寄。

寄样必须用干冰吗，冰袋行不行？

汉广只收干冰寄送，干冰量≥维持到货后 24 h 余量；冰袋/常温拒收，解冻 2 h 内 IAA、JA 可降解 30% 以上，到货拒测。

最低要寄多少鲜重？

汉广常规激素 0.5 g 鲜重起步，含量极低类（BR、部分 GA 亚型）建议 ≥1 g；单粒种子/分生组织等微量样提前沟通，走微量提取。

干样能不能测激素？

汉广不推荐，风干/烘干过程 IAA、GA 类损失显著；若只能提供干样，需标注烘干温度与时间，汉广按基质匹配曲线校正，但数据仅作参考。

同批植物我想分根、茎、叶、果分别测，要分装成几管？

汉广建议按器官独立分装标记，每管 ≥0.5 g 鲜重，液氮速冻后同盒干冰寄；混器官 pooling 会抹平组织特异性，审稿人常质疑。

采样时能加 BHT 或 PVPP 吗？

汉广前处理默认加 BHT 抗氧化、PVPP 吸附多酚色素；用户若自带抑制剂需在送样单备注，避免与汉广内控 SOP 重复叠加。

胁迫处理样本（干旱/盐/病）采样窗口多长？

汉广建议：ABA 在胁迫后 1–6 h 即达峰，JA/SA 在 0.5–3 h 达峰，采样时间点需匹配激素动力学，否则易出现”未检出”误判。

二、指标选型

研究抗逆（旱/盐/病）一般测哪几项？

汉广推荐套餐：ABA + JA + JA-Ile + SA + MEJA，覆盖胁迫主线；若做 PR 基因关联可加 IAA/GA₃ 看生长-防御权衡。

研究种子萌发/果实发育测什么？

汉广推荐：GA₁/GA₃/GA₄ + ABA + IAA，GA/ABA 比值是萌发破休眠核心指标，果实软化可补 ETH（GC-MS 顶空）。

组织培养愈伤分化该盯哪些激素？

汉广建议：CTK（tZ/tZR/IP） + IAA + BA，CTK/IAA 比值 1:10→1:5 区间愈伤分化效率最高，需配合外源激素配方反推。

哪些激素可以同一管提取一起上机？

汉广 LC-MS/MS 同批可跑：IAA、IBA、ABA、GA₁/GA₃/GA₄/GA₇、tZ、tZR、SA、MESA、JA、MEJA、H₂JA、JA-Ile、12-OPDA，共 16 项。

哪些必须单独测、不能拼车？

汉广单列项目：ACC（乙烯前体，LC-MS/MS）、BR（油菜素内酯，需 SPE 小柱+衍生）、独脚金内酯 5-DS、MT 褪黑素，前处理与常规激素不兼容。

赤霉素那么多亚型，我该测哪几个？

汉广热门 4 个：GA₁/GA₃/GA₄/GA₇；GA₃ 最常用（促伸长），GA₁ 与 dwarf 突变相关，GA₄ 双子叶偏好，预算紧可只跑 GA₃+GA₄。

乙烯能直接测吗？

汉广使用HS-GC（岛津GC-2030 气相色谱仪+顶空 ），测的是 ETH 释放速率，需新鲜组织密封顶空瓶恒温孵育后取气，不能混进 LC-MS/MS 批次。

我想测的激素不在汉广列表里怎么办？

汉广可新建方法：提供文献方法与标准品信息，技术评估设备匹配度；收费 = 建方法费 + 进口标品费，预实验 2–3 样摸索，再决定主实验规模。

三、方法与仪器

汉广用的是什么仪器和方法？

汉广主平台 UHPLC-QqQ-MS/MS（C18 50×2.1 mm, 1.8 μm），流动相甲醇-0.1% 甲酸，MRM 模式；常规 7–16 项激素一针同跑，ESI± 切换。

为什么不用 ELISA 而用 LC-MS/MS？

汉广 ELISA 仅用于高通量初筛（抗体交叉反应 10–20%）；LC-MS/MS 有同位素内标校正，可区分 IAA/IBA/相似结构，pg 级灵敏度，发 SCI 主流认。

同位素内标汉广给配哪几种？

汉广常规激素池配 D/IAA-d₅、ABA-d₆、SA-¹³C₆、JA-d₅、GA₃-d₂ 等，前处理前加进样品追踪提取损失，抵消基质效应 ±20% 内。

基质效应怎么控制？

汉广用 C18-SPE 净化 + 基质匹配标准曲线，复杂基质（辣椒叶、茶叶、根系）进一步 GCB脱色；ME 一般压在 ±20% 内，超标重做。

BR 为什么要单独测还贵？

汉广 BR 用 Waters SPE 小柱 + 衍生化 + 进口标品（货期 4–8 周），前处理步骤 2 倍于常规激素，标品单价千元级，故单项报价高于 IAA/ABA 三倍左右。

细胞分裂素有几种，汉广能拆开吗？

汉广可测：tZ、cZ、tZR、cZR、iP、iPR、DZ、DZR、6-KT、6-BA；游离 Z（tZ+cZ）与结合态 ZR 建议同时跑，才能算细胞分裂素活化比例。

JA-Ile 和 JA 是什么关系，都要测吗？

汉广建议共测：JA 是前体，JA-Ile 是 COI1 受体结合的活性形式；只测 JA 会漏掉”激素存在但不激活”的状态，抗性机制文章常被返修补 JA-Ile。

SA 和 MESA 都要跑吗？

汉广默认同批：SA 是游离态，MeSA是挥发/系统信号态；做系统获得性抗性（SAR）必须两个都有，单测 SA 会被审稿人问”挥发通路呢”。

四、方法学数据

汉广常规激素的 LOD/LOQ 是多少？

汉广 LC-MS/MS 多基质验证：IAA LOD 0.2–3.7 ng/mL、ABA 0.4–3.7、GA 0.3–4.0、SA 0.5–2.7 ng/mL；LOQ 普遍 0.8–12 ng/mL，R²≥0.99。

加标回收率汉广控在什么区间？

汉广常规激素三水平加标回收率60-120%，BR/ACC 等单列项目 80–120%；平行样 RSD<10%，低含量 JA-Ile 类放宽至 <15%，符合 SANTE/12682/2019。

标准曲线怎么铺？

汉广梯度 0.5-500ng/mL，5-7 个点，线性回归，R²≥0.99；每个 batch 带空白、 QC ，失控重跑。

批内和批间精密度多少？

汉广 Intra-day / Inter-day CV 各激素常规激素一般<10%，个别激素化合物指标放宽；连续 3 批 QC 漂移超 15% 整批作废重提。

和 GB/T、AOAC 比对认不认？

汉广方法学对齐 GB/T 39992（IAA LOD≤0.1 ng/g）、AOAC 2007.01（LC-MS/MS）、EU SANTE/12682/2019（高分辨 MS 可溯源），发稿底栏可写。

不同植物基质（叶/根/果/籽）数据能直接比吗？

汉广建议用基质匹配曲线各自定量，糖/多酚高的果实基质 LOQ 会比叶高 2–3 倍；跨基质直接比数值会被审稿人挑，需归一化到鲜重或蛋白。

平行样汉广默认做几个？

汉广每批样品分析时，应做平行双样分析，每批抽取10%的样品做平行分析，当批样品数≤10个时，应至少随机抽取不少于1个样品做平行分析。

未检出是真没有还是方法不行？

汉广未检出会附 LOD 值供判断；若同行文献同组织能检出而汉广未出，优先查采样（是否错过峰）> 保存（是否降解）> 基质抑制，不首先怀疑方法。

五、寄样与合同

送样单必须填哪些字段？

汉广要求：物种、组织部位、处理条件、采样时间、保存方式（-80/液氮）、目标激素清单、是否要同位素内标、是否急件，缺一项不排批次。

汉广接不接受用户自带标准品？

汉广原则上用内控标品（可追溯证书），用户自带需提前备案纯度与批次，仅在建方法阶段接受，常规批次不走用户标品。

样品到货后汉广多久出结果？

汉广常规激素 7–15 个工作日，BR/ACC/独脚金 15–20 工，建方法项目 +10 工；加急需书面申请，加急费按 30–50% 上浮。

样品不够能退吗？

汉广到货核验鲜重 <0.3 g 且用户未提前沟通微量方案的，直接退回不排批次；已提取后剩余残渣-20℃留1个月，逾期销毁。

汉广能给发票和检测资质附件吗？

汉广交付含 CMA/CNAS 标识报告（如适用）、PDF 正式报告、Excel 原始积分、标准曲线、QC 盲评；开票类目”检测服务费”，专票/普票均可。

数据能直接拿去发 SCI 吗？

汉广 LC-MS/MS+ 三水平加标 + RSD 这套方法学描述可直接拷进 Materials and Methods，近 3 年客户发 Plant Cell/Plant Physiol/J Exp Bot 均过方法学审。

汉广保不保数据趋势和文献一致？

汉广保方法合规、保回收率在窗、保 RSD 合规；不保”趋势一定和某某文献一致”——物种/品种/胁迫强度/取样窗口差异太大，这是科研变量不是检测变量。

六、报告与解读

报告里会给原始积分和谱图吗？

汉广默认交付：PDF 报告 + Excel 原始面积/浓度表 + 标准曲线参数（斜率/截距/R²）+ MRM 通道色谱图 + QC 盲评，审稿人要 raw 可直接给。

含量单位汉广用什么？

汉广默认 ng/g 鲜重（FW），可换算 ng/g 干重、pmol/g；BR 因含量 0.01–0.1 ng/g FW 建议用 pg/g 报，用户需在下单时指定单位。

汉广做不做数据归一化？

汉广只报激素绝对含量；归一化到蛋白/鲜重/干重由用户自行算，汉广可提供同批样品的干重率参考数据（需提前说要测干重）。

两份处理组差异 2 倍算显著吗？

汉广只报数不代做统计；n=3 时 2 倍差异若 RSD>15% 大概率不显著，建议用户至少 n=5 生物学重复再上机，否则 p 值撑不住。

审稿人问”为什么 IAA 比文献低一个数量级”怎么回？

汉广可补一份方法学比对：查采样是否避光、是否液氮、-80 还是 -20 存的、GA 类是否超 40℃ 转运；90% 案例是样品端不是检测端。

激素比值（GA/ABA、CTK/IAA）汉广直接给吗？

汉广 Excel 表里给各激素绝对值，比值需用户自己算；汉广技术备注可提示：GA/ABA>1 倾向促生长，<1 倾向胁迫抑制，不同物种/组织差异极大仅作粗判。

七、避坑与特殊场景

IAA 为什么特别容易降解？

汉广提示：IAA 在光、pH>7、IAA 氧化酶共存下快速降解；采样遮光 + 酸性提取（0.1% 甲酸）+ BHT，回收率可从 60% 拉回 90%+。

GA 亚型那么多，只测 GA₃ 会不会被审稿人怼？

汉广经验：GA₃ 是最保守的起点，若物种是拟南芥可补 GA₄，水稻补 GA₁；纯生理表型文章单 GA₃ 能过，分子机制/突变体文章建议 GA₁/GA₃/GA₄ 三联。

根瘤/固氮相关该加哪几项？

汉广建议：细胞分裂素池（tZ/tZR/IP） + IAA + ABA + SA，根瘤起始阶段 CYCD 与 CK 关联强，缺 CK 数据会被反问”固氮-激素串扰讲不透”。

幼苗 vs 成熟叶同批测要注意什么？

汉广提示：幼苗 IAA/CK 高、ABA 低；成熟叶反之。同批上机要分 SFE 小柱负载，幼苗 0.5 g 够，老叶多酚高建议 1 g + 加倍 PVPP。

能做激素空间分布吗（不同叶位/根茎交界）？

汉广常规池不支持显微分区；若要做需用户自己 dissection 到 0.5 g 以上再寄，或走激光微 dissection + 纳米流 LC-MS，汉广目前不接后者。

汉广接不接受学生自己带方法上门做？

汉广不接受”自带方法上机”模式，所有样品走汉广 SOP 保质控链；用户方法有特殊要求（提取溶剂 pH、SPE 柱型号）可在建方法阶段谈定制，费用另计。