钼锑抗比色法检测植物中全磷元素

内容根据NY/T 2017-2011《植物中氮、磷、钾的测定》整理

检测原理

在一定酸度下，消解液中的正磷酸在三价锑离子存在时，与钼酸铵生成三元杂多酸，被抗坏血酸还原为磷钼蓝。通过分光光度计在波长700nm处测定其吸光度，吸光度值与磷含量成正比。

方法优势

·灵敏度高：能够检测到低浓度的磷，适合植物组织中磷含量的测定。

·操作简便：样品处理和显色反应简单，适合一般实验室操作。

·成本低：设备和试剂简单，适合大规模样品分析。

·快速高效：从样品处理到测定结果快速，适合快速检测需求。

·标准化：有明确的国家标准（如NY/T 2017-2011），结果可靠且具有可比性。

实验试剂

·硫酸（H₂SO₄）：用于消解样品。

·过氧化氢（H₂O₂，30%）：用于消解样品。

·氢氧化钠（NaOH）：用于中和消解液。

·硼酸（H₃BO₃）：用于配制硼酸接收液。

·钼酸铵：用于配制钼锑抗显色剂。

·酒石酸锑钾：用于配制钼锑抗显色剂。

·抗坏血酸：用于配制钼锑抗显色剂。

·二硝基苯酚指示剂：用于中和反应的指示。

标准溶液：

·磷标准储备液（1000mg/L）：用于配制标准系列溶液。

·磷标准使用液（10mg/L）：用于标准工作曲线的绘制。

实验仪器

·分光光度计：用于测定吸光度。

·分析天平：感量为0.0001g，用于精确称量样品。

·消煮炉：用于加热消解样品。

检测步骤

1. 试样制备：

·新鲜样品：清洗后制成匀浆。

·干样：先在80℃～90℃鼓风烘箱中烘15min～30min，然后降温至60℃～70℃，赶尽水分，粉碎，过40目筛混匀。

2. 试样消解：

·称取均匀植物干样0.1g～0.5g（精确到0.0001g）或新鲜试样1g～5g（精确到0.0001g）于100mL消化管内。

·加入5mL硫酸，摇匀，分两次加入过氧化氢（每次2mL），待激烈反应结束后，置于消煮炉上加热消煮，直至溶液呈无色或清亮。

·冷却后，用水将消化液全部转移到100mL容量瓶中，定容，过滤或澄清，得到待测液A。

3. 测定：

（1）标准工作曲线：

·分别吸取磷标准使用液（10mg/L）0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL于50mL容量瓶中。

·加入与吸取待测液A等体积的空白消化溶液，用水稀释至约30mL。

·加1滴～2滴二硝基苯酚指示剂，滴加240g/L氢氧化钠溶液中和至刚呈黄色。

·再加入1滴2mol/L硫酸溶液，使溶液的黄色刚刚褪去。

·加入钼锑抗显色剂（5.0mL），摇匀，用水定容。

·在室温高于15℃的条件下放置30min，用分光光度计在波长700nm处测定其吸光度，绘制标准曲线。

（2）样品测定：

·根据样品中磷含量，准确吸取待测液A1mL～10mL于50mL容量瓶中。

·按标准工作曲线操作步骤显色后测定吸光度。

·用空白调零，以测得的吸光度值由标准曲线查得待测液中磷（P）含量。

·如果吸光度超过1.0mg/L磷（P）的吸光度时，则将待测液稀释后重新测定。

汉广检测提供一站式全磷检测服务：样品处理-上机检测-数据分析-质控审核-实验报告

计算方法

样品中磷（P）的含量以质量分数计，数值以毫克每千克（mg/Kg）表示，计算公式为：

磷含量=V × V₁ × C / V₂ × m

其中：

• V为待测液A定容体积（mL）；

• V₁为吸取得测液A体积（mL）；

• V₂为显色溶液定容体积（mL）；

• C为从标准曲线查得的磷含量（mg/L）；

• m为试样质量（g）。

精密度要求

在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过这两次测定算术平均值的8%。

注意事项

1. 试剂与溶液的准备

·试剂纯度：确保所用试剂均为分析纯，且所用水应达到GB/T 6682规定的二级水要求。

·标准溶液的配制：磷标准使用液需逐级稀释，确保浓度准确。钼锑抗显色剂需现用现配，以保证反应的灵敏度和准确性。

·溶液的避光保存：钒钼酸铵溶液和钼锑抗显色剂需避光保存，防止光照导致溶液分解或变质。

2. 样品消解

·样品处理：新鲜样品需清洗并去除表面水分后制成匀浆；干样需先烘干、粉碎并过40目筛。

·消解过程：消解时需严格控制硫酸和过氧化氢的加入量，避免剧烈反应导致样品飞溅或损失。消解过程中需多次补加过氧化氢，直至溶液清亮。

·消解终点判断：消解终点以溶液呈无色或清亮为准，确保有机物完全分解。

3. 测定操作

·标准曲线绘制：标准系列溶液需与样品处理方法一致，确保标准曲线的准确性。标准曲线需在显色反应完成后30分钟内测定。

·显色反应条件：显色反应需在规定的酸度和温度下进行，确保反应完全且稳定。加入显色剂后需充分摇匀。

·吸光度测定：分光光度计需预热并校准，确保测量的准确性。测定波长为700nm，吸光度超过范围时需稀释样品。

4. 结果计算与精密度

计算公式：使用标准公式计算磷含量，确保单位换算正确。

精密度要求：重复性条件下，两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的8%。

5. 其他注意事项

仪器校准：分光光度计和分析天平需定期校准，确保测量的准确性。

空白试验：每次测定需同时进行试剂空白试验，以扣除试剂背景干扰。

稀释倍数：若样品需稀释，需在计算中加入稀释倍数。