果糖:是一种单糖,天然存在于水果、蜂蜜中,甜度高于葡萄糖,是构成蔗糖的一部分。在食品工业中常用作甜味剂。
葡萄糖:也是单糖,是生物体内能量的主要来源,广泛存在于植物和动物体内。作为血糖的主要成分,对维持生命活动至关重要。
蔗糖:由一分子葡萄糖和一分子果糖通过糖苷键连接而成,是最常见的食糖形式,广泛用于食品甜味剂。
麦芽糖:由两分子葡萄糖组成,是淀粉部分水解的产物,常见于麦芽和某些发酵食品中,也用作甜味剂和发酵原料。
乳糖:存在于哺乳动物乳汁中,由一分子葡萄糖和一分子半乳糖组成,有些人因缺乏乳糖酶而不能有效消化乳糖,会出现乳糖不耐症。
木糖:属于五碳糖(戊糖),存在于某些植物中,如木质部,是一种低热量的甜味剂,有时用于特殊食品和饮料中。
半乳糖:单糖,是乳糖的组成部分,也可以作为单独的糖存在于某些糖醇和寡糖中,对婴幼儿成长发育很重要。
棉子糖:一种三糖,由葡萄糖、果糖和半乳糖组成,属于功能性低聚糖,作为益生元可促进肠道健康,常见于豆科植物中。
水苏糖:也是一种三糖,结构与棉子糖类似,但以半乳糖代替了棉子糖中的果糖,同样具有益生元特性,促进肠道有益菌群生长。
山梨醇:属于糖醇,广泛用作食品添加剂,具有较低的热量和不会引起显著血糖升高的特性,作为甜味剂在糖尿病食品中很受欢迎,也用作保湿剂和防冻剂。
检测指标
指标 |
方法 |
标准 |
用量/g |
样品要求 |
果糖 |
高效液相色谱法 |
GB 5009.8-2016 食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定 |
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鲜样 |
葡萄糖 |
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蔗糖 |
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麦芽糖 |
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乳糖 |
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木糖 |
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半乳糖 |
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棉子糖 |
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水苏糖 |
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山梨醇 |
基本原理
高效液相色谱法(HPLC)是一种用于分离、鉴定和定量液体中半挥发和不挥发化合物的分析技术。在糖组分的检测中,HPLC能够通过特定的色谱柱将复杂的混合物中的单糖进行分离,并通过检测器对分离后的单糖进行定性和定量分析。色谱柱的选择、流动相的组成和pH值、柱温等是影响分离效果的关键因素。通过调整这些参数,可以提高单糖的分离度和检测灵敏度,从而提高分析的准确性和可靠性。
技术优势
HPLC在糖组分检测中的优势在于其高分离效率、快速分析速度、高灵敏度以及良好的重复性。与其他检测方法相比,HPLC还具有更高的分辨率和更广的适用范围,使其成为单糖检测中的首选方法。此外,HPLC的操作相对简单,可以减少样品前处理过程中可能导致的单糖损失或修饰,从而提高结果的准确性。
流程概述
样品前处理
提取:根据样品类型,使用合适的溶剂和方法提取糖分。例如,食品样品可能需要酸水解或酶解来释放糖分。
净化:通过固相萃取(Solid Phase Extraction, SPE)或凝胶渗透色谱(Gel Permeation Chromatography, GPC)等方法去除样品中的杂质,提高糖类的纯度。
衍生化(可选):对于某些糖类,如单糖,可能需要进行衍生化处理,以便在HPLC上获得更好的分离和检测效果。
高效液相色谱分析
色谱柱选择:根据待分析糖类的性质选择合适的色谱柱,如反相柱、离子交换柱或亲水作用液相色谱(Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography, HILIC)柱。
流动相选择:根据色谱柱类型和待分析糖类的极性选择合适的流动相,如水、甲醇、乙腈等,可能需要添加酸或盐来调节pH和离子强度。
检测器选择:HPLC检测糖类时,常用的检测器包括示差折光检测器(RID)、蒸发光散射检测器(ELSD)、脉冲安培检测器(PAD)和荧光检测器等,其中RID和ELSD适用于多数糖类的检测。
数据分析
定性分析:通过与标准品的保留时间比较,结合检测器的响应特性,确定样品中糖类的种类。
定量分析:通过标准曲线法,使用已知浓度的标准品建立糖类的响应值与浓度的关系,进而计算样品中糖类的浓度。
注意事项
梯度洗脱:对于复杂样品中的多种糖类,可能需要使用梯度洗脱程序,以优化分离效果。
柱温和流速:根据分析需求调整柱温和流速,以获得最佳的分离和检测条件。
重复性和稳定性:确保分析条件的重复性和色谱柱的稳定性,以获得可靠的数据。
样本要求
采集的样品,均应在短时间内进行分析检测,如不能及时分析检测的则需要进行处理和保存,一般应遵循的原则是:环境干燥、温度较低、避免光照、密封保存。
鲜样:取样后立即放入用于包装样本的铝箔或冷冻保存管(提前进行编号)并放入液氮速冻,-80℃超低温冰箱保存,足量干冰邮寄运输,避免反复冻融。
烘干样:取样后用柔软湿布擦净,不应用水冲洗。尽快晾干并将样品置于105 ℃的烘箱中烘 15min以终止样品中酶的活动。经过杀青之后,应立即降低烘箱的温度,维持在70 ~80℃,直到烘至恒重。若测定样品中金属元素的含量,应注意金属器械的污染问题,以防干扰。
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